Bài 17. Kĩ thuật SHPT
2 tháng 1 năm 2025Khoảng 1 phút
Tách chiết acid nucleic
Điện di
Phân tử di chuyển trên bản gel
- gel agarose: độ phân giải thấp, phân tách DNA từ 0,5 - 20 kB
- gel polyacrylamide: độ phân giải cao, phân tách DNA <1000 bp
Tốc độ di chuyển các phân tử trong bản gel phụ thuộc
- Khối lượng phân tử
- Cấu trúc phân tử
- Điện thế
- Nồng độ gel (mật độ lỗ gel)
Phản ứng chuỗi trùng hợp (PCR)
Mục tiêu:
- Tăng số lượng DNA/gen
- Phát hiện DNA
Nguyên lý:
- Cơ chế sao chép DNA tự nhiên
- Sự biến tính DNA mạch kép
- Sự bắt cặp nucleotide (lai) một cách có kiểm soát bằng nhiệt độ
- PCR khuếch đại đoạn DNA mục tiêu ở giữa hai mồi
Nguyên liệu:
- DNA khuôn
- Mồi
- dNTPs
- DNA pol
Mồi (primer)
- Cặp mồi (mồi xuôi, mồi ngược)
- Đặc hiệu:
- DNA ngắn 16-30 nucleotide
- Trình tự hai bên đoạn DNA mục tiêu
- Nhiệt độ nóng chảy Tm
Các bước:
- Biến tính 95°C (cắt liên kết H)
- Bắt cặp mồi 50-60°C
- Kéo dài 72°C (DNA polymerase tạo mạch mới)